ذرات ویروس فلج اطفال در سلول‌های پیش‌آلوده با ویروس رئو تشکیل نمی‌شوند
بخش ویروس‌شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی ایران، تهران، ایران.
موسسه واکسن و سرم‌سازی رازی، کرج، ایران.
چکیده
زمینه و اهداف: مهار رشد ویروسی در سلول‌های آلوده به دو ویروس مختلف توضیح داده شده است. این پدیده که به عنوان تداخل ویروسی شناخته می‌شود، می‌تواند در سیستم‌های میزبان ویروس‌های مختلف مانند تداخل عفونت انتروویروس بر روی سویه‌های واکسن ویروس فلج اطفال رخ دهد.
در این مطالعه، سلول‌های HeLa آلوده به ویروس رئو را با ویروس فلج اطفال سوپرآلوده کردیم تا تعیین کنیم که آیا ویروس فلج اطفال می‌تواند در چنین سلول‌هایی تکثیر شود و ذرات ویروسی بالغ را تشکیل دهد.
روش‌ها: سلول‌ها ابتدا با ویروس رئو آلوده شدند و سپس با ویروس فلج اطفال سوپرآلوده شدند. مقدار ذرات ویروسی با استفاده از میکروسکوپ الکترونی و تست تیتر پلاک اندازه‌گیری شد.
مقدار بازده ویروسی نیز با استفاده از تکنیک RT-PCR در زمان واقعی برای اندازه‌گیری بار ویروسی در سلول‌های آلوده اندازه‌گیری شد.
نتایج: در سلول‌های ابتدا آلوده به ویروس رئو و سپس سوپرآلوده به ویروس فلج اطفال، تنها ذرات ویروس رئو تولید شد. تولید ویروس با ارزیابی تیتر ویروسی با استفاده از تکنیک تیتر پلاک و میکروسکوپ الکترونی تعیین شد.
هیچ ذره ویروس فلج اطفالی در سلول‌های سوپرآلوده مشاهده نشد. مقدار بار ویروس فلج اطفال در سلول‌های آلوده به ویروس رئو نیز به طور چشمگیری کاهش یافت.
نتیجه گیری: رشد ویروس فلج اطفال در سلول‌های آلوده به ویروس رئو مهار شد و هیچ ذره ویروس فلج اطفال عفونی قابل مشاهده نبود. این مشاهده ممکن است در برنامه واکسیناسیون ویروس فلج اطفال مهم باشد.
مقدمه
پدیده تداخل ویروسی یا مهار رشد ویروس توسط ویروس دیگر برای چندین ویروس شناخته شده است و مکانیزم چنین پدیده‌ای تا حدودی توصیف شده است. در این پدیده، عفونت توسط ویروس اول منجر به مقاومت سلول‌ها یا بافت‌ها به عفونت توسط ویروس دوم می‌شود.
روش‌ها
سلول‌ها و ویروس‌ها
برای تکثیر ویروس رئو از سلول‌های خط سلولی L موش استفاده شد. سلول‌ها در لایه‌های تک‌سلولی با استفاده از محیط حداقل ضروری Joklick همراه با ۵٪ سرم جنینی گاوی رشد داده شدند.
برای تکثیر ویروس فلج اطفال از سلول‌های Vero استفاده شد. این سلول‌ها در DMEM حاوی ۵٪ سرم جنینی گاوی رشد داده شدند.
سوپرآلودگی
سلول‌های Vero با ویروس رئو آلوده شدند و پس از ۲ ساعت انکوباسیون در ۳۷ درجه سانتی‌گراد، عفونت‌زا برداشته شد و سلول‌ها با ویروس فلج اطفال سوپرآلوده شدند.
سلول‌های آلوده در DMEM در ۳۷ درجه سانتی‌گراد و ۵٪ CO۲ انکوباسیون شدند. پس از ۳۲ ساعت، سلول‌های آلوده برداشت شده و بازده ویروس با روش TCID۵۰ و تیتر پلاک ارزیابی شد.
میکروسکوپ الکترونی
سلول‌های سوپرآلوده ۲۴ ساعت پس از عفونت برداشت شدند. سلول‌ها در سرعت پایین برای ۱۵ دقیقه سانتریفیوژ شدند. رسوب دوباره در ۱۰۰ میکرولیتر بافر Tris 0.1M pH ۷.۵ حل شد.
سلول‌های آلوده ۵ بار یخ‌زدایی و ذوب شدند تا ذرات ویروسی داخل سلولی آزاد شوند. لوله‌ها در میکروفیوژ در ۸۰۰۰ دور در دقیقه برای ۳ دقیقه سانتریفیوژ شدند.
تعیین بار ویروسی
مونولایه‌ای از سلول‌های حدوداً ۱۰۵ با ویروس رئو با moi ۲۰ آلوده شدند و پس از ۲ ساعت با ویروس فلج اطفال با همان moi سوپرآلوده شدند.
سلول‌ها پس از ۲۴ ساعت برداشت شده و رسوب سلولی در ۱ میلی‌لیتر PBS معلق شد. ۱۰۰ میکرولیتر برداشت شده و RNA طبق دستورالعمل‌های سازنده استخراج شد.
نتایج
بازده ویروس در سلول‌های سوپرآلوده
مونولایه‌ای از سلول‌های Vero با ویروس رئو و ویروس فلج اطفال در زمان‌ها و شرایط مختلف آلوده شدند. سلول‌های آلوده کنترل با هر یک از دو ویروس به همان moi آلوده شدند و به طور مشابه انکوباسیون شدند.
پس از ۳۲ ساعت، کشت‌ها برداشت شده و مقدار بازده ویروس تعیین شد.
میکروسکوپ الکترونی
برای تعیین مورفولوژیکی کدام یک از دو ویروس در سلول‌های سوپرآلوده با ویروس فلج اطفال تولید شدند، سلول‌های آلوده ۲۴ ساعت پس از عفونت برداشت شدند و عصاره سلولی با میکروسکوپ الکترونی با رنگ‌آمیزی منفی بررسی شد.
بحث
تداخل بین ویروس‌هایی که به یک خانواده تعلق دارند یا بین اعضای غیرمرتبط در هنگام عفونت هم‌زمان سلول‌ها گزارش شده است.
قدردانی
نویسندگان از “دانشگاه علوم پزشکی ایران” برای حمایت مالی از این پروژه تشکر می‌کنند.
منابع
- Whitaker-Dowling P, Youngner JS. Viral interference-dominance of mutant viruses over wild-type virus in mixed infections. Microbiol Rev. 1987;51(2):179-91.
- Rozinov MN, Fields BN. Interference of reovirus strains occurs between the stages of uncoating and dsRNA accumulation. J Gen Virol. 1996;77 (Pt 7):1425-9.
- Li BZ, Zhuang WZ, Chen P, Fu JX. [Effects of RNA interference targeting hypoxia-inducible factor-1alpha (HIF-1alpha) on chemosensitivity of leukemia K562 cells towards homoharringtonine]. Ai Zheng. 2008;27(7):723-8.
